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產(chǎn)品詳情
操作說(shuō)明
注意事項(xiàng)
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
本試劑盒為高靈敏度的兩步法免疫組化試劑盒，適用于一抗來(lái)源為小鼠的抗體的后續(xù)顯色。試劑盒中包含辣根過(guò)氧化物酶HRP偶聯(lián)標(biāo)記的山羊抗小鼠IgG，本產(chǎn)品適用于小鼠來(lái)源的一抗，在IHC、Western blot實(shí)驗(yàn)中，HRP標(biāo)記的山羊抗小鼠二抗與小鼠來(lái)源一抗（先與抗原反應(yīng)）結(jié)合后，再與DAB反應(yīng)。DAB是辣根過(guò)氧化物酶（HRP）的底物，在HRP的催化下，DAB產(chǎn)生棕色沉淀，實(shí)現(xiàn)信號(hào)放大和顯色。
儲(chǔ)存與運(yùn)輸
冰袋（wet ice）運(yùn)輸；二抗-20℃保存，DAB稀釋液和50×DAB原液4℃保存；有效期12個(gè)月。
準(zhǔn)備工作
1. 自備PBS、細(xì)胞核復(fù)染試劑（推薦蘇木素染液G1004、蘇木素分化液G1039、蘇木素返藍(lán)液G1040）、梯度酒精、二甲苯、封片劑等。
2. 配制二抗工作液：將HRP標(biāo)記山羊抗小鼠二抗用PBST（pH 7.2-7.4）以1:200比例稀釋，得到二抗工作液?，F(xiàn)配現(xiàn)用，48 h內(nèi)使用。
3. 配制DAB顯色工作液：每1 mL DAB稀釋液中加入20 μL 50×DAB原液，混勻備用。按需配制，現(xiàn)配現(xiàn)用。
操作步驟
1. 按照常規(guī)免疫組化步驟，組織切片經(jīng)前期脫蠟、抗原修復(fù)、封閉、一抗孵育后，經(jīng)PBS洗三次，每次5 min。
2. 二抗孵育：每張切片上滴加50-100 μL 二抗工作液完全覆蓋組織，室溫孵育30-60 min。經(jīng)PBS洗三次，每次 5min。
3. DAB顯色：每張切片上滴加50-100 μL DAB工作液，室溫孵育數(shù)分鐘，通過(guò)顯微鏡下觀察控制顯色至預(yù)期效果，然后立即水洗終止顯色。
4. （可選）細(xì)胞核復(fù)染：切片經(jīng)蘇木素染液染色3-5 min，自來(lái)水洗；經(jīng)蘇木素分化液快速分化3-5 s，自來(lái)水洗；自來(lái)水沖洗返藍(lán)或經(jīng)蘇木素返藍(lán)液返藍(lán)3-5 s。
5. 封片：切片按常規(guī)步驟經(jīng)梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹(shù)膠封片。
注意事項(xiàng)
1. 如果免疫組化顯色時(shí)出現(xiàn)背景過(guò)深，考慮延長(zhǎng)洗滌時(shí)間，使用適當(dāng)?shù)姆忾]液進(jìn)行封閉，滅活內(nèi)源性過(guò)氧化氫酶，縮短顯色時(shí)間，降低二抗?jié)舛鹊?。如果沒(méi)有顯色或顯色太淺，可適當(dāng)提高一抗、二抗?jié)舛?，延長(zhǎng)顯色時(shí)間，其次檢測(cè)二抗是否被正常顯色。
2. DAB人體有害，操作時(shí)請(qǐng)小心，做好防護(hù)避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。
本產(chǎn)品僅供科研用途，不用于臨床診斷！
凡合肥萬(wàn)物生物科技有限公司銷售的產(chǎn)品均有嚴(yán)格的質(zhì)量保證。如發(fā)現(xiàn)產(chǎn)品存在包裝規(guī)格疑問(wèn)，請(qǐng)于收貨之日起七日內(nèi)向我公司總部或當(dāng)?shù)剞k事處提出，并請(qǐng)保證該產(chǎn)品，以備本公司進(jìn)行核對(duì)檢驗(yàn)。如果發(fā)現(xiàn)有質(zhì)量問(wèn)題，請(qǐng)于收貨后一月內(nèi)保留產(chǎn)品50%以上的量，以便本公司回收產(chǎn)品進(jìn)行質(zhì)檢，確認(rèn)產(chǎn)品質(zhì)量。如逾期，則視為已經(jīng)對(duì)本公司產(chǎn)品進(jìn)行驗(yàn)收。 聲明：如發(fā)生產(chǎn)品索賠事宜，本公司僅在產(chǎn)品價(jià)格范圍內(nèi)酌情賠償，恕不接受超出產(chǎn)品價(jià)格范圍之賠償?？蛻粼谑褂眠^(guò)程中有任何技術(shù)問(wèn)題可以撥打技術(shù)售后服務(wù)電話我們隨時(shí)給予解答。
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