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產品詳情
操作說明
注意事項
產品信息
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產品名稱 |
產品編號 |
規(guī)格 |
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支原體檢測試劑盒（PCR法） |
FKU019 |
50T |
產品簡介
支原體污染會對細胞各個方面都造成不良影響，已經成為細胞培養(yǎng)中高度重視的問題，因此，定期進行支原體污染檢測是十分必要的。本支原體檢測試劑盒是采用PCR方法，特異性的檢測各種培養(yǎng)細胞生物材料（如細胞培養(yǎng)物、實驗動物分泌物、動物血清等）中支原體的污染。試劑盒使用的混合引物是針對支原體16s rRNA序列的保守區(qū)域設計的特異性引物，可直接使用細胞培養(yǎng)液作為PCR模板，特異性擴增支原體DNA，搭配配套的Mycoplasma PCR Mix（2×）一小時內即可完成，本試劑盒檢測靈敏度高，可檢測低至20個拷貝的支原體。
儲存與運輸
冰袋（wet ice）運輸；-20℃保存，有效期12個月。
組成
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Component Number |
Component |
G1900-50T |
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G1900-1 |
Mycoplasma PCR Mix（2×） |
1 mL |
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G1900-2 |
Mycoplasma Primer Mix |
100 μL |
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G1900-3 |
Positive Control |
50 μL |
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G1900-4 |
Mycoplasma Free Water |
1 mL |
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說明書 |
1份 | |
操作步驟
1. 樣品準備：取適量待檢細胞培養(yǎng)上清于潔凈的PCR管中，利用PCR儀95℃熱處理5 min后作為模板。血清樣本可利用Mycoplasma Free Water稀釋后，取適量樣本于潔凈的PCR管中，利用PCR儀95℃熱處理5 min后作為模板；
2. PCR體系配制：每次實驗需設置陰性對照（將1 μL待檢樣品換成等量的Mycoplasma Free Water）與陽性對照（在1 μL待檢樣品中加入0.5 μL Positive Control后一起作為Template），實驗時戴一次性口罩與手套，謹慎操作，防止操作不當引入外源支原體污染；
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Component |
Volume |
|
Template |
1 μL |
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Mycoplasma Primer Mix |
2 μL |
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Mycoplasma PCR Mix（2×） |
10 μL |
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Mycoplasma Free Water |
To 20 μL |
3. PCR程序設置：
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Step |
Temperature |
Time |
Cycles |
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Initial Denaturation |
98℃ |
2 min |
1 |
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Denaturation |
98℃ |
20 s |
30 |
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Annealing |
56℃ |
25 s |
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Extension |
72℃ |
10 s |
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Final extension |
72℃ |
5 min |
1 |
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Hold |
4-16℃ |
Forever |
|
4. 凝膠電泳：取10 μL PCR產物，使用1%瓊脂糖凝膠進行電泳檢測；
5. 結果分析：每次實驗通過與陰性對照、陽性對照檢測結果比較確認樣品支原體污染情況，陽性條帶大小500 bp左右。如陰性對照檢測結果中有條帶很有可能是PCR體系中出現污染，建議重新實驗確認結果。如有必要，也可對PCR產物進行常規(guī)測序，以確定具體的支原體種屬。
注意事項
1. 本試劑盒可以檢測M.orale，M.arginini，M.bovis，M.fermentans，M.gallisepticum，M.hominis，M.pirum，Ureaplasma spp，M.hyorhinis，M.pneumoniae，A.laidlawii等至少11種以上支原體污染。
2. 所有試劑在使用前于冰上徹底解凍、混勻，使用完畢后于-20℃保存。
3. 每次實驗必須設置陰性對照、陽性對照，實驗組建議設置樣品模板梯度。
4. 操作時必須佩戴口罩，嚴格按照PCR操作標準，防止引入外源污染影響實驗結果。
5. 為了確保細胞實驗的可靠性及穩(wěn)定性，建議定期進行支原體污染檢測。
6. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
產品僅供科研用途，不用于臨床診斷！
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