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產品詳情
操作說明
注意事項
產品描述
本試劑盒提供了簡單而又快速的10% SDS-PAGE彩色(綠色)凝膠配制試劑，能夠同時制備下層膠(即分離膠)和上層膠(也稱濃縮膠、積成膠)，用戶只需準備制膠設備，即可快速制備蛋白凝膠。同時，試劑盒中上層膠溶液B中含有綠色染料，使得蛋白點樣孔清晰呈現(xiàn)，實現(xiàn)了加樣過程的可視化，極大的提高了加樣效率。該綠色染料可在上層膠中穩(wěn)定存在，不會隨著電泳而遷移至下層膠，不會影響電泳和染色效果，電泳完成后也便于識別上層膠并切除，不影響后續(xù)Western Blot等實驗。
本試劑盒可制備常規(guī)尺寸的凝膠50塊，具體配制的凝膠塊數(shù)量與凝膠的厚薄以及凝膠的大小有關。
儲存與運輸
冰袋（wet ice）運輸；
4℃避光保存，有效期12個月。
操作步驟
1. 根據(jù)目的蛋白分子量和所選電泳緩沖液不同，選擇合適濃度的SDS-PAGE下層膠，參照表格如下：
|
SDS-PAGE分離膠濃度 |
最佳分離范圍（kDa） （Tris-Glycine電泳緩沖液） |
最佳分離范圍（kDa） （SWE快速高分辨電泳緩沖液） |
|
6% |
50-300 |
15-300 |
|
8% |
30-130 |
10-250 |
|
10% |
20-100 |
5-150 |
|
12% |
10-60 |
3-100 |
|
15% |
<40 |
<60 |
2. 配制10% AP溶液：稱取AP（過硫酸銨）粉末0.1 g，用1 mL水完全溶解。該溶液4℃存貯1-2周有效，-20℃保存3個月有效；
3. 根據(jù)實驗需求，等比例混合溶液A和B，加入適量的10% AP溶液（100倍稀釋），分別配制下層膠溶液、上層膠溶液。不同規(guī)格以及不同厚度的玻璃板可以等比例調整上層膠和下層膠溶液的配制體積，以常用規(guī)格8.3 cm×7.3 cm凝膠板（單塊）為例，推薦配制體系如下表格：
|
配制組別 |
組分 |
0.75 mm玻璃板 |
1.0 mm玻璃板 |
1.5 mm玻璃板 |
|
下層膠溶液 |
6%下層膠溶液A |
2 mL |
2.5 mL |
4 mL |
|
6%下層膠溶液B |
2 mL |
2.5 mL |
4 mL |
|
|
10% AP |
40 μL |
50 μL |
80 μL |
|
|
上層膠溶液 |
上層膠溶液A |
1 mL |
1 mL |
1.5 mL |
|
上層膠溶液B(綠色) |
1 mL |
1 mL |
1.5 mL |
|
|
10% AP |
20 μL |
20 μL |
30 μL |
4. 裝配好凝膠制具，先加入配制好的下層膠溶液，并立即緩慢均勻的加入配制好的上層膠溶液（也可使用蒸餾水封住下層膠液面，待下層膠凝固充分后再加入配制好的上層膠溶液，約15-30 min），插入梳子，待其凝固（約15-30 min左右）后即可使用；
5. 配制完成的凝膠如不能當天使用，可4℃保存1-2天。
6. 推薦電泳條件：
a. 使用SWE快速高分辨電泳緩沖液進行電泳：200-250 V，25-35 min；
b. 使用Tris-Glycine電泳緩沖液進行電泳：上層膠90 V，約30 min（marker進入分離膠）；下層膠150-180 V，約60-90 min(可根據(jù)實際情況調整)。
注意事項
1. 上層膠溶液B長時間靜置容易產生絮狀沉淀，使用前請輕輕顛倒混勻。
2. 上層膠溶液B和下層膠溶液B均含有SDS，使用時請勿劇烈搖晃，避免產生氣泡，從而影響凝膠灌制。
3. 預混液中存在單體丙烯酰胺，對人體有害，操作時請注意做好防護措施。
4. 為了保證樣本同時進入分離膠，直接灌制上層膠時需緩慢均勻的加入配制好的上層膠溶液。
5. 加入AP之后盡快灌制凝膠，請勿長時間放置。
6. 膠的凝固與溫度有顯著的正相關性。同等條件下，溫度越高，凝固速度越快。
7. 如需進一步加快凝膠速度，臨配膠前可按需補充適量TEMED，同時增加0.5倍10% AP使用量。
8. 本公司同時提供其他彩色（紅色、黃色、藍色）上層膠溶液，以區(qū)別不同樣本不同凝膠電泳。
9. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
本產品僅供科研用途，不用于臨床診斷！
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合肥萬物生物科技有限公司
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