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產(chǎn)品詳情
操作說明
注意事項
產(chǎn)品簡介
本試劑盒為高靈敏度的兩步法免疫組化試劑盒，適用于一抗來源為兔的抗體的后續(xù)顯色。試劑盒中包含辣根過氧化物酶HRP偶聯(lián)標(biāo)記的山羊抗兔IgG，本產(chǎn)品適用于兔來源的一抗，在IHC、Western blot實驗中，HRP標(biāo)記的山羊抗兔二抗與兔來源一抗（先與抗原反應(yīng)）結(jié)合后，再與DAB反應(yīng)。DAB是辣根過氧化物酶（HRP）的底物，在HRP的催化下，DAB產(chǎn)生棕色沉淀，實現(xiàn)信號放大和顯色。
儲存與運輸
冰袋（wet ice）運輸；二抗-20℃保存，DAB稀釋液和50×DAB原液4℃保存；有效期12個月。
準備工作
1. 自備PBS。細胞核復(fù)染試劑。梯度酒精、二甲苯、封片劑等。
2. 配制二抗工作液：將HRP標(biāo)記山羊抗兔二抗用PBST（pH 7.2-7.4）以1:200比例稀釋，得到二抗工作液?，F(xiàn)配現(xiàn)用，48 h內(nèi)使用。
3. 配制DAB顯色工作液：每1 mL DAB稀釋液中加入20 μL 50×DAB原液，混勻備用。按需配制，現(xiàn)配現(xiàn)用。
操作步驟
1. 按照常規(guī)免疫組化步驟，組織切片經(jīng)前期脫蠟、抗原修復(fù)、封閉、一抗孵育后，經(jīng)PBS洗三次，每次5 min。
2. 二抗孵育：每張切片上滴加50-100 μL 二抗工作液完全覆蓋組織，室溫孵育30-60 min。經(jīng)PBS洗三次，每次 5min。
3. DAB顯色：每張切片上滴加50-100 μL DAB工作液，室溫孵育數(shù)分鐘，通過顯微鏡下觀察控制顯色至預(yù)期效果，然后立即水洗終止顯色。
4. （可選）細胞核復(fù)染：切片經(jīng)蘇木素染液染色3-5 min，自來水洗；經(jīng)蘇木素分化液快速分化3-5 s，自來水洗；自來水沖洗返藍或經(jīng)蘇木素返藍液返藍3-5 s。
5. 封片：切片按常規(guī)步驟經(jīng)梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。
注意事項
1. 如果免疫組化顯色時出現(xiàn)背景過深，考慮延長洗滌時間，使用適當(dāng)?shù)姆忾]液進行封閉，滅活內(nèi)源性過氧化氫酶，縮短顯色時間，降低二抗?jié)舛鹊?。如果沒有顯色或顯色太淺，可適當(dāng)提高一抗、二抗?jié)舛?，延長顯色時間，其次檢測二抗是否被正常顯色。
2. DAB人體有害，操作時請小心，做好防護避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。
本產(chǎn)品僅供科研用途，不用于臨床診斷！
凡合肥萬物生物科技有限公司銷售的產(chǎn)品均有嚴格的質(zhì)量保證。如發(fā)現(xiàn)產(chǎn)品存在包裝規(guī)格疑問，請于收貨之日起七日內(nèi)向我公司總部或當(dāng)?shù)剞k事處提出，并請保證該產(chǎn)品，以備本公司進行核對檢驗。如果發(fā)現(xiàn)有質(zhì)量問題，請于收貨后一月內(nèi)保留產(chǎn)品50%以上的量，以便本公司回收產(chǎn)品進行質(zhì)檢，確認產(chǎn)品質(zhì)量。如逾期，則視為已經(jīng)對本公司產(chǎn)品進行驗收。 聲明：如發(fā)生產(chǎn)品索賠事宜，本公司僅在產(chǎn)品價格范圍內(nèi)酌情賠償，恕不接受超出產(chǎn)品價格范圍之賠償?？蛻粼谑褂眠^程中有任何技術(shù)問題可以撥打技術(shù)售后服務(wù)電話我們隨時給予解答。
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