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產(chǎn)品詳情
操作說明
注意事項
產(chǎn)品簡介
HE染色，即蘇木素(Hematoxylin)和伊紅(Eosin)聯(lián)合染色，是組織學(xué)、胚胎學(xué)、病理學(xué)教學(xué)與科研中最基本、使用最廣泛的技術(shù)方法。蘇木素染液為堿性，主要使細胞核內(nèi)的染色質(zhì)、胞質(zhì)內(nèi)的核酸著藍色至藍紫色；伊紅為酸性染料，主要使細胞質(zhì)和細胞外基質(zhì)中的成分著紅色。HE染色可用于觀察比較正常組織與病變組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)，可初步確定或鑒別病變組織、細胞中出現(xiàn)的異常物質(zhì)。經(jīng)本產(chǎn)品HE染液染色的組織或細胞，細胞核呈藍色至藍紫色，細胞漿呈紅色，胞漿與胞核對比鮮明。
儲存與運輸
常溫保存與運輸。有效期18個月。
實驗前準備
自備蘇木素分化液、蘇木素返藍液、二甲苯、梯度乙醇、無水乙醇、中性樹膠等。
操作步驟
1. 樣本前處理
(1) 對于石蠟切片：切片依次經(jīng)二甲苯脫蠟10 min，更換新鮮的二甲苯脫蠟10 min，無水乙醇 5min，新鮮無水乙醇5 min，90%乙醇5 min，75%乙醇5 min，自來水洗。
(2) 對于冰凍切片：-20℃保存的冰凍切片需靜置5-10 min恢復(fù)至室溫。如需固定，則經(jīng)所需固定液室溫后自來水洗。
2. HE染色
(1) 蘇木素染色：上述處理好的切片，進入蘇木素染液染色3-5 min，自來水洗；
(2) 分化：切片經(jīng)蘇木素分化液2-5 s，自來水流水充分沖洗；
(3) 返藍：蘇木素返藍液返藍2-5 s，自來水流水充分沖洗；
(4) 伊紅染色：切片依次經(jīng)85%、95%梯度乙醇脫水，各5 min。然后進入伊紅染液(醇溶)中染色5 min，經(jīng)兩次無水乙醇脫水各5 min；
(5) 透明：切片再經(jīng)新鮮無水乙醇脫水5 min，二甲苯透明5 min，更換新鮮的二甲苯再透明5 min。
(6) 封片：滴加中性樹膠進行封片。
注意事項
1. 染色后用特定溶液將組織中過多結(jié)合的染液脫去，這個過程稱為分化作用，所用溶液稱為分化液。在HE染色種常用低濃度鹽酸作為分化液，因為酸能破壞蘇木素的醌型結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)，使色素與組織分離而褪色。組織在經(jīng)蘇木素染色后，必須經(jīng)過分化去除組織中過多結(jié)合及非特異性吸附的染料，才能進行伊紅染色，確保細胞核與胞漿顯色分明?？墒褂锰K木素分化液。分化過程中，根據(jù)組織切片厚度、組織類型等結(jié)合鏡下觀察適當調(diào)整分化時間。
2. HE染色中蘇木素染色后的返藍很重要。蘇木素在酸性條件下為離子狀態(tài)，呈紅色；在堿性條件下呈藍色。組織切片經(jīng)酸性分化液分化后呈紅色或粉紅色，需立即水洗終止分化，再用弱堿性溶液使蘇木素，這個過程就是返藍作用。如果沒有專用的返藍液，用溫水浸洗也能使細胞核返藍，只是所需時間略長。推薦蘇木素返藍液。
3. 蘇木素及伊紅染色程度可以根據(jù)染色需要進行調(diào)整染色時間。
4. 蘇木素染液可重復(fù)使用多次，每次用完后需密封保存，防止有效成分揮發(fā)。當組織或細胞著色明顯偏淺或顏色異常時請更換新的染液。
5. 用于染色后脫水的無水乙醇純度需大于99.9%。如果乙醇含水，伊紅會褪色導(dǎo)致染色不均勻。
6. 伊紅染液(醇溶)可反復(fù)使用數(shù)次，當組織著色明顯偏淺時建議更換新的染液。
7. 操作時請穿實驗服，佩戴一次性手套。
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