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產(chǎn)品詳情
操作說(shuō)明
注意事項(xiàng)
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
HE染色，即蘇木素(Hematoxylin)和伊紅(Eosin)聯(lián)合染色，是組織學(xué)、胚胎學(xué)、病理學(xué)教學(xué)與科研中最基本、使用最廣泛的技術(shù)方法。蘇木素染液為堿性，主要使細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)、胞質(zhì)內(nèi)的核酸著藍(lán)色至藍(lán)紫色；伊紅為酸性染料，主要使細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞外基質(zhì)中的成分著紅色。HE染色可用于觀察比較正常組織與病變組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)，可初步確定或鑒別病變組織、細(xì)胞中出現(xiàn)的異常物質(zhì)。經(jīng)本產(chǎn)品HE染液染色的組織或細(xì)胞，細(xì)胞核呈藍(lán)色至藍(lán)紫色，細(xì)胞漿呈紅色，胞漿與胞核對(duì)比鮮明。
儲(chǔ)存與運(yùn)輸
常溫保存與運(yùn)輸。有效期18個(gè)月。
實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備
自備蘇木素分化液、蘇木素返藍(lán)液、二甲苯、梯度乙醇、無(wú)水乙醇、中性樹(shù)膠等。
操作步驟
1. 樣本前處理
(1) 對(duì)于石蠟切片：切片依次經(jīng)二甲苯脫蠟10 min，更換新鮮的二甲苯脫蠟10 min，無(wú)水乙醇 5min，新鮮無(wú)水乙醇5 min，90%乙醇5 min，75%乙醇5 min，自來(lái)水洗。
(2) 對(duì)于冰凍切片：-20℃保存的冰凍切片需靜置5-10 min恢復(fù)至室溫。如需固定，則經(jīng)所需固定液室溫后自來(lái)水洗。
2. HE染色
(1) 蘇木素染色：上述處理好的切片，進(jìn)入蘇木素染液染色3-5 min，自來(lái)水洗；
(2) 分化：切片經(jīng)蘇木素分化液2-5 s，自來(lái)水流水充分沖洗；
(3) 返藍(lán)：蘇木素返藍(lán)液返藍(lán)2-5 s，自來(lái)水流水充分沖洗；
(4) 伊紅染色：切片依次經(jīng)85%、95%梯度乙醇脫水，各5 min。然后進(jìn)入伊紅染液(醇溶)中染色5 min，經(jīng)兩次無(wú)水乙醇脫水各5 min；
(5) 透明：切片再經(jīng)新鮮無(wú)水乙醇脫水5 min，二甲苯透明5 min，更換新鮮的二甲苯再透明5 min。
(6) 封片：滴加中性樹(shù)膠進(jìn)行封片。
注意事項(xiàng)
1. 染色后用特定溶液將組織中過(guò)多結(jié)合的染液脫去，這個(gè)過(guò)程稱為分化作用，所用溶液稱為分化液。在HE染色種常用低濃度鹽酸作為分化液，因?yàn)樗崮芷茐奶K木素的醌型結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)，使色素與組織分離而褪色。組織在經(jīng)蘇木素染色后，必須經(jīng)過(guò)分化去除組織中過(guò)多結(jié)合及非特異性吸附的染料，才能進(jìn)行伊紅染色，確保細(xì)胞核與胞漿顯色分明?？墒褂锰K木素分化液。分化過(guò)程中，根據(jù)組織切片厚度、組織類型等結(jié)合鏡下觀察適當(dāng)調(diào)整分化時(shí)間。
2. HE染色中蘇木素染色后的返藍(lán)很重要。蘇木素在酸性條件下為離子狀態(tài)，呈紅色；在堿性條件下呈藍(lán)色。組織切片經(jīng)酸性分化液分化后呈紅色或粉紅色，需立即水洗終止分化，再用弱堿性溶液使蘇木素，這個(gè)過(guò)程就是返藍(lán)作用。如果沒(méi)有專用的返藍(lán)液，用溫水浸洗也能使細(xì)胞核返藍(lán)，只是所需時(shí)間略長(zhǎng)。推薦蘇木素返藍(lán)液。
3. 蘇木素及伊紅染色程度可以根據(jù)染色需要進(jìn)行調(diào)整染色時(shí)間。
4. 蘇木素染液可重復(fù)使用多次，每次用完后需密封保存，防止有效成分揮發(fā)。當(dāng)組織或細(xì)胞著色明顯偏淺或顏色異常時(shí)請(qǐng)更換新的染液。
5. 用于染色后脫水的無(wú)水乙醇純度需大于99.9%。如果乙醇含水，伊紅會(huì)褪色導(dǎo)致染色不均勻。
6. 伊紅染液(醇溶)可反復(fù)使用數(shù)次，當(dāng)組織著色明顯偏淺時(shí)建議更換新的染液。
7. 操作時(shí)請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服，佩戴一次性手套。
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